推广 热搜: elisa  TCR  PCR  荧光  dNTP  生物  基因    时间分辨荧光  内切酶 

唾液皮质醇(氢化可的松)检测方法

   日期:2014-07-15     来源:苏州东奇生物科技有限公司    浏览:222    评论:0    
核心提示:检测仪器:LC-20AD 高效液相色谱仪(日本岛津)前处理方法:将1.2 mL乙酸乙酯加入到0.5mL的唾液或者内标液(10L 曲唑酮)中,涡旋3 min,离心2 min,将
检测仪器:LC-20AD 高效液相色谱仪(日本岛津)

前处理方法:将1.2 mL乙酸乙酯加入到0.5mL的唾液或者内标液(10μL 曲唑酮)中,涡旋3 min,离心2 min,将1.0 mL的上层清液转移到另外一个2 mL的离心管中。利用50 ℃的氮气吹干提取物。将50μL硫酸/乙醇(12.9mol/L; 70:30, v/v))混合液加入到吹干的残留物中,涡旋混匀30s,70℃ 保持 2min,然后加入0.5ml水,用碎冰块冷却10min。将混合衍生溶液移入活化好的萃取柱,缓缓过柱,洗脱,取20μL进样。

活化:100μL 甲醇, 100μL水

洗脱:50μL 甲醇

色谱条件: 色谱柱:Shimadzu C18(150mm×4.6mm, 5μm);流动相:甲醇:50mM 乙酸钠=80:20;用0.45μm微孔滤膜过滤,超声脱气;流速:1.0mL/min;波长:229nm;进样量:20μL;温度:30℃。


A:唾液加标10μg/ml,PFSPE法

B:唾液加标10μg/ml,LLE法

C:唾液加标10μg/ml,C18-SPE法

D:空白水溶液和加了2.56μg/L内标的唾液样品


PFSPE法与ELISA法比较
  PFSPE法 ELISA法
唾液中皮质醇一般含量 <10 ng/mL
灵敏度 0.01 ng/mL 1 ng/mL
方法线性范围 0.1-20 ng/mL 30-480 ng/mL
干扰检测的物质 通过色谱分离,大部分物质不干扰检测 可的松、肾上腺酮、皮质酮、去氧皮质酮、21-脱氧皮质醇、11-脱氧皮质醇、氢化泼尼松、强的松等物质都有与抗体发生交叉免疫的可能
稳定性 RSD<10% 受试剂盒的批次和存放条件等因素影响
 
打赏
 
更多>同类技术资料
0相关评论

推荐图文
推荐技术资料
点击排行
网站首页  |  关于我们  |  联系方式  |  网站地图  |  排名推广  |  广告服务  |  积分换礼  |  网站留言  |  RSS订阅  |  违规举报