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双色红外荧光技术在蛋白磷酸化检测中的应用

   日期:2015-01-22     浏览:121    评论:0    
核心提示:【作者】 刘靖华; 唐靖; 蓝兴国; 刘亚伟; 李志杰; 陈芳; 邓鹏; 姜勇; 【Author】 LIU Jing-hua, TANG Jing, LAN Xing-guo, LIU Ya-wei, LI Zhi-jie, CHENG Fang, DENG Peng, JIANG Yong Department of Pathophysiology and Key Laboratory of Functional Proteomics of Guangdong Province, Southern Me
【作者】 刘靖华; 唐靖; 蓝兴国; 刘亚伟; 李志杰; 陈芳; 邓鹏; 姜勇;

【Author】 LIU Jing-hua, TANG Jing, LAN Xing-guo, LIU Ya-wei, LI Zhi-jie, CHENG Fang, DENG Peng, JIANG Yong Department of Pathophysiology and Key Laboratory of Functional Proteomics of Guangdong Province, Southern Medical University, Guangzhou 510515, China; Gene Limited Company, Shanghai, 200233, China

【机构】 南方医科大学病理生理学教研室和广东省功能蛋白质组重点实验室; 基因有限公司; 南方医科大学病理生理学教研室和广东省功能蛋白质组重点实验室 广东广州510515; 广东广州510515; 上海200233;

【摘要】 目的通过与化学发光法比较,了解双色红外荧光技术在目标蛋白磷酸化检测中的优势。方法分别取内毒素休克小鼠不同时间肺组织,制备组织匀浆蛋白样品。用SDS-PAGE电泳分离后转膜,将膜分别与磷酸化的或/和总的 p42/44 MAPK抗体孵育,二抗用耦联有Alexa Fluor 680和IRDye 800的荧光抗体或辣根过氧化物酶抗体,通过双色红外荧光系统和化学发光法进行蛋白质磷酸化检测。结果红外荧光检测技术和化学发光检测结果均显示内毒素处理后小鼠肺组织p42/44 MAPK磷酸化水平发生了改变,1 h最高,12 h以后逐渐恢复到接近正常水平。两种方法检测结果显示了较好的一致性,相比之下双色红外荧光技术具有更高的灵敏度、操作方便、节省时间及可以同时检测两种蛋白等优点。结论双色红外荧光技术在蛋白磷酸化的检测方面具有较好的应用前景。

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