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荧光显微镜标本制作方法/步骤

   日期:2014-09-28     来源:明美光电技术    浏览:135    评论:0    
核心提示:(一) 玻片及盖玻片(Slide and Coverslips)玻片及盖玻片品质必须很好而没有荧光,玻片厚度≦1.0mm 者便可用,玻片之清洗,必须以中性清洁剂洗净,再浸于含有3%HCl 之乙醇12~ 24 小时,然后再储存于纯酒精。要用时,以清洁纱布擦净或火焰烘干。用完后可浸于水中,移去封埋物,再经清洁剂及重酪酸-硫酸混合物*处理。*重酪
(一) 玻片及盖玻片(Slide and Coverslips)
玻片及盖玻片品质必须很好而没有荧光,玻片厚度≤1.0mm 者便可用,玻片之清洗,必须以中性清洁剂洗净,再浸于含有3%HCl 之乙醇12~ 24 小时,然后再储存于纯酒精。要用时,以清洁纱布擦净或火焰烘干。用完后可浸于水中,移去封埋物,再经清洁剂及重酪酸-硫酸混合物*处理。
***重酪酸一硫酸混合物之配法:
1.粗制重酪酸钾300 gm
2.20% 硫酸水溶液3000 ml
3.使用珐琅质或陶质容器,先放入20% 硫酸水溶液,然后缓缓加入粗制重酪酸钾,以玻璃棒搅拌,此时会发热,俟冷却后使用。目前已有处理好的玻片出售,使用上非常方便。

(二) 组织切片 (Tissue Sections)
组织切片愈薄愈好(4μ),如果切片太厚,则可能自体及非特异荧光增加,目前都用冷冻切片机(Cryostat) 来切,冷冻切片机包括冰冻柜(Refrigerated Cabinet),温度在0℃~-30℃ 之间,切片机(Microtome) 放在里面,将组织在-20℃ 冰冻10 分钟,就可以切,切下之薄片,以玻片捺下后在室温急速干燥。制备好之切片必须尽可能马上固定及染色。如果切片必须储放短时间( 约1 周),则固定后密封储放于-70℃,要染色时,切片必需回温到室温方启开。

(三) 细胞培养法 (Cell Culture Preparation)
细胞培养法一般用盖玻片在组织培养盘( 例如24 孔)或培养在玻璃片(Chamber Slide) 上,再和普通接种病毒一样,接种可疑病材乳剂,培养数天,取出,干燥、固定、水洗,再用标示抗体染色以检查特异荧光。

(四) 涂抹法或捺压法(Smear and Impression Preparation)
所用玻片需很薄,一般用盖玻片代用,将所要检查之病材,如血液、组织液或其他病材,在玻片上涂抹或捺压,涂抹或捺压片在室温用吹风机或电风扇( 以冷风吹干),以甲醇或丙酮固定,放于密封标本箱于-20℃ 备染或马上染色。

(五) 固定 (Fixation)
除了使组织固定于玻片外,另一方面亦可助抗原-抗体复合物之形成,例如把脂质溶解,使抗体抗原较易反应。一般用100% Methanol 在室温作用2 分钟,或丙酮于-20℃ 下10 分钟来固定微生物抗原及病毒。

注意事项
一般染色标本,应立即观察,因当时荧光最显著;若不能马上观察,须储存于干燥盒(Polyethylene Bag) 内,有时在0~5℃ 储存,可保存一个月左右,仍可呈现特异荧光。
 
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