推广 热搜: elisa  TCR  PCR  dNTP  荧光  生物    基因  时间分辨荧光  内切酶 

羧基微球与蛋白偶联方法

   日期:2014-08-29     来源:汉诺生物    作者:张黔松    浏览:154    评论:0    
核心提示:简述羧基 (COOH) 微球可与蛋白偶联。通过碳二亚胺EDAC活化微球表面的羧基,生成活性酯,再与目标蛋白上的伯胺基反应,完成偶联。汉诺公司提供的Bangs Laboratories 生产的 PolyLink Protein Coupling Kit 可用于羧基微球与蛋白(抗体)的偶联,操作十分简单。尤其适合直径1um或是更大微球与蛋白的偶联。每个试剂盒提供足够5
简述

羧基 (COOH) 微球可与蛋白偶联。通过碳二亚胺EDAC活化微球表面的羧基,生成活性酯,再与目标蛋白上的伯胺基反应,完成偶联。


汉诺公司提供的Bangs Laboratories 生产的 Polylink Protein Coupling Kit 可用于羧基微球与蛋白(抗体)的偶联,操作十分简单。尤其适合直径1um或是更大微球与蛋白的偶联。每个试剂盒提供足够50个偶联反应所需的各类试剂,其中每个反应可偶联的蛋白为200-500ug。


材料

• Polylink 偶联缓冲液 (50mM MES, pH 5.2; 0.05% Proclin ® 300): 55mL

• Polylink 洗涤/贮存缓冲液 (10mM Tris, pH 8.0; 0.05% Bovine Serum Albumin; 0.05% Proclin ® 300): 45mL

• Polylink EDAC (碳二亚胺): 750mg. Note: -20°C干燥保存.如果有条件的充氮气保存更好。使用前将装有EDAC的瓶子置于干燥器内,侍其恢复至室温时,现配现用。


所需实验材料:

• 离心机
• 试管

实验步骤

1. 将微球(磁珠),Polylink 偶联缓冲液, 和 Polylink 洗涤/贮存缓冲液放置至室温。

2. 吸取 12.5mg 微球或磁珠至 1.5-2mL 聚丙烯离心管内。

3. 500-1000 x G 离心 5-10 分钟 使微球沉淀.离心的时间可以根据球的大小自我把握。

4. 重悬微球沉淀于 0.4mL of Polylink 偶联缓冲液中。

5. 再 500-1000 x G 离心 5-10 分钟 使微球沉淀。

6. 重悬微球沉淀于 0.17mL of Polylink 偶联缓冲液中。

7. 将100mg 的 EDAC 溶于 50ul的 Polylink 偶联缓冲液中,配制成200mg/ml的EDAC反应液. 现配现用。

8. 加 20μL 的上述 EDAC 溶液加入装有微球的离心管内。

9. 小心的来回颠倒离心管混匀。

10. 加蛋白(抗体) 200-500μg. 继续小心的来回颠倒离心管混匀. 蛋白与微球结合的量与反应体系中蛋白浓度和微球的大小有关. 具体请参考下列的例子。

11. 轻柔振荡离管,室温孵育反应 30-60 分钟. 请注意,来回颠倒离心管是. 最好的振荡方法;反应时间越长,蛋白偶联的效率会越高。

12. 500-1000 x G 离心10分钟, 收集上清液用以计算偶联上的蛋白量。

13. 重悬沉淀于 0.4mL Polylink 洗涤/贮存液中。

14. 重复步骤 12-13, 将两次上清收集在一起计算偶联蛋白量。

15. 偶联上蛋白的微球试剂置于 2-8°C 保存。
 
打赏
 
更多>同类技术资料
0相关评论

推荐图文
推荐技术资料
点击排行
网站首页  |  关于我们  |  联系方式  |  网站地图  |  排名推广  |  广告服务  |  积分换礼  |  网站留言  |  RSS订阅  |  违规举报