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一步法恒温支原体检测试剂盒(细胞培养专用)

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品牌: Umibio
货号: C4056L1060
规格: 48 T
单价: 1050.00元/盒
所在地: 上海
有效期至: 长期有效
最后更新: 2018-08-20 12:01
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一步法恒温支原体检测试剂盒(细胞培养专用)

C4056L1060

a

-20℃

1050

产品描述

《一步法恒温支原体检​测试剂盒》主要用于检测细胞培养上清或别的液体样品(如血清)中是否含有支原体污染,该试剂盒仅用于基础科研。

哺乳动物细胞的培养,支原体(Mycoplasma)污染是个世界性的问题。支原体污染几乎可以改变细胞的所有参数,导致实验结果的不准确、甚至完全错误。从2013年开始,《Nature》期刊已正式要求投稿的文章,如涉及细胞培养都要进行支原体检测。

本试剂盒可以检测:(1)M.Hyorhinis、(2)M.Fermentans、(3)M.Arginini、(4)M. hominis、(5)M. orale、(6)M. salivarium、(7)M.pirum、(8)Acholeplasma Laidlawii、(9)M. agalactiae、(10)M.bovis、(11)M. buccale、(12)M. arthritidis、(13)M. pulmonis等几乎所有常见的污染细胞的支原体(注:M.为Mycoplasma的缩写)。以上13种支原体约占细胞支原体污染的99%以上,本试剂盒产品全部可以检测。绝大多数支原体污染集中于前8种。注意:本试剂盒无法检测Ureaplasma Urealyticum支原体!Ureaplasma Urealyticum在支原体污染种极其罕见。

 

与PCR法检测支原体比较,本试剂盒产品优势优势显著:

比较内容

支原体检测PCR法

一步法恒温支原体检测试剂盒

操作时间

3小时

1小时

是否需要样品处理

样品处理,DNA提取

无需样品处理,直接使用上清

灵敏度

灵敏度低

较PCR法提高1000倍

是否需要电泳

需要电泳及染色

不需电泳,结果目测

 

使用方法

1. 反应

(1)取三个反应管,分别标记为阳性对照管(Positive)、测试管(Test)和阴性对照管(Negative),各加入25 μL的水化溶液(-20℃保存的水化液可以放37℃水浴融化),吹吸数次直到所有冻干粉剂彻底溶解(冻干品较难溶解,需要缓慢吹吸约20-50下。此过程,如有大气泡产生或者小气泡过多,必须去除,否则严重影响反应结果!气泡可以用套管离心的方法去除)。尽量在没有操作过支原体的房间进行上述步骤。将所有反应管盖子盖上,在另外一个房间内进行下一步的操作。

(2)往阳性对照管中加入1 μL阳性支原体DNA,测试管中加入1 μL待测细胞培养液,阴性对照管不加。

(3)选择以下方式之一进行反应:

① 水浴内反应:往每个反应管内加入25 μL矿物油,以防止水份挥发,盖上盖子,将反应管插入带孔的漂板内,放入已经升温到61℃的水浴内,准确反应60分钟。

l 注:试剂盒所用的酶对温度敏感,器显示温度与实际温度的温差尽量不超过0.5℃。如果温差超过2℃,将导致酶活性降低,扩增速度也降低,在规定的反应时内,阳性对照可能无法呈现典型的蓝绿色。此时需用水银温度计校准水浴的温度。

② PCR仪上反应:有PCR仪的实验室,强烈建议在PCR仪上进行反应,这样可以准确控制反应的时间和温度。PCR仪参数如下:61℃,60 min;20℃, ∞;热盖温度,100 ℃。

l 注:在带热盖的PCR仪上进行反应,无需在反应管内加入矿物油。

 

2. 结果判断:61℃反应60分钟后,立刻取出反应管,放于室温。以一张白纸或白色泡沫盒(优选白色泡沫)为背景,通过反应管溶液颜色的变化,即可判断检测结果。如果溶液为蓝绿色,则说明有支原体污染;如果为粉红色或紫红色,则说明没有支原体污染(如图1)。

l  注1:有时,同一批次阴性反应之间的颜色也可能会略有差异属于正常现象,比如有些呈粉红色,有些呈紫红色。只在待测样品与阳性对照一样呈典型的蓝绿色时,可判定为阳性,有支原体污染。

l  注2:反应结果的判断,必须在反应后2小时内进行判断,因为即使在室温,扩增反应也会缓慢进行,反应管颜色也会逐渐变化,反应后长时间放置,可能出现错判。

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