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GelRed 核酸染料

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品牌: Umibio
货号: 500μL
规格: C1001L1122
单价: 1.00元/盒
有效期至: 长期供应
最后更新: 2017-08-23 14:23
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GelRed 核酸染料(500μL in water, 10,000 X)

C1001L1122

500μL

室温

550

GelRed是一种结合于所有dsDNA双螺旋小沟区域的具有独特设计的荧光染料。在游离状态下,GelRed发出微弱的荧光,但一旦与双链DNA结合后,荧光大大增强。因此,GelRed的荧光信号强度与双链DNA的数量相关,可以根据荧光信号检测出PCR体系存在的双链DNA数量。GelRed与 EB 有相同的光谱特性,无需改变滤光片及观察装置。标准的 EB 滤光片或 SYBR 滤光片都适用,使用与观察 EB 相同的普通紫外凝胶透射仪观察即可,在 300 nm 紫外光附近可得到最佳激发。GelRed的最大吸收波长约为518 nm,发射波长最大约为605 nm。GelRed 与双链DNA的亲和力非常高,因此可以用做电泳前染色,对分子生物学中常用的酶(如:Taq 酶、逆转录酶、内切酶、T4连接酶等)没有抑制作用。另外,GelRed 与EB相比,诱变能力大大降低。

GelRed最初由美国Biotium公司研发,艾姆斯试验表明,这种新型染料细胞透过性、诱变性方面表现优异,得到市场广泛认可。

运输与保存方法

常温运输、保存,保质期24个月。

使用方法

1.胶染法(用法同EB)

(1)制胶时加入GelRed核酸染料(例如:每50mL琼脂糖溶液中加入5μL GelRed 10,000×储液,以此比例类推)。

(2)按照常规方法进行电泳。

注意事项:

此方法染色染料用量相对较少,500 μL染料大约可以做100块50 mL的胶。

由于GelRed具有良好的热稳定性,可以在热的琼脂糖溶液中直接添加,而不需要等待溶液冷却。摇晃,振荡或者翻转以保证染料充分混匀。也可以选择将GelRed储液加到琼脂糖粉末和电泳缓冲液中,然后用微波炉或其他常用方式加热以制备琼脂糖凝胶。GelRed兼容所有常用的电泳缓冲溶液。

含有染料的预制凝胶溶液可以大量制备,并长期保存直到使用。

此方法不适合预制聚丙烯酰胺凝胶,对于聚丙烯酰胺凝胶请使用泡染法。

2.泡染法

(1)按照常规方法进行电泳。

(2)用H2O将GelRed 10,000×储液稀释约3,300倍到0.1 M NaCl中,制成3×染色液。(例如将15μL GelRed 10,000×储液和5 mL 1 M NaCl加到45 mL H2O中)。

(3)将凝胶小心地放入合适的容器中,如聚丙烯容器中,缓慢加入足量的3×染色液浸没凝胶,室温振荡染色30 min左右,最佳染色时间根据凝胶厚度以及琼脂糖浓度不同而略有不同。对于含3.5~10%丙烯酰胺的凝胶,染色时间通常介于30 min到1 h,并随丙烯酰胺含量增加而延长。

注意事项:

1)用泡染法染色时,染料用量较多,单次使用的染色液可重复使用3次左右。3×GelRed染色液可以大量制备,在室温下避光保存直至用完。

2)如果总是看到条带弥散或分离不理想,建议使用泡染法染色以确认问题是否与染料有关。

3)如果染色后问题依旧存在,则说明问题与染料无关,请尝试:降低琼脂糖浓度、延长凝胶时间以保证边缘清晰、改进上样技巧或选择泡染法染色。

3.预染法(最省染料的染色方法,按25μL体积上样,500μL原液理论做20万个样品)

1)该方法适用于琼脂糖凝胶电泳和PAGE凝胶电泳

2)工作液的配制:用电泳缓冲液将10000×的GelRed原液稀释1000倍,即为10 X GelRed工作液。GelRed工作液可以置2-8℃冷藏一个月以上。

3)制胶:按常规方法制胶,不含任何染料。

4)样品染色:向分析样品中加入GelRed工作液和载样缓冲液,室温放置10分钟,使GelRed与样品中DNA充分结合。GelRed工作液加入量为总上样量的1/10,使GelRed在上样时的终浓度为1X.

5)DNA Marker染色:将5μL DNA Marker和1μLGelRed工作液混匀,室温放置5分钟,使GelRed与DNA充分结合。

6)上样、电泳:按常规操作。

注意事项:

根据染料分子量小,带电荷少的特性开发本染色方法,按照一块胶10个样品计算,500μL原液理论上可以完成2万块胶的染色。

疑难解答

1. 在常规用酒精沉淀核酸的过程中,GelRed 可以全部从双链核酸上去掉。

2. 如果想对用 GelRed 染过的胶进行 Southern blots,建议在预杂化和杂化溶液中加入 0.1%- 0.3% 的SDS。

3. 在紫外照射透视下,与双链 DNA 接合的 GelRed 呈现红色荧光。

4. GelRed对玻璃和非聚丙烯材料具有一定亲合力。建议在稀释、贮存、染色等使用过程中用聚丙烯类容器。

5. GelRed原液在室温保存,如放置冰箱保存会产生部分沉淀,使用前适当加热并摇匀即可正常使用。

 

几种核酸染料比较

名称

灵敏度

稳定性

适用性

安全性

价格

GelRed

通用大小片段电泳染色

美国安全认定无毒

GelGreen

通用大小片段电泳染色

美国安全认定无毒

SYBR Green I

极高

100bp以上片段电泳染色

花菁染料,低毒

SYBR Green II

极高

单链核酸分子电泳染色

花菁染料,低毒

Gold View I

500bp以上片段电泳染色

高毒性,强致癌

EB

100bp以上片段电泳染色

强致癌,强诱变

 

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