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LAMP(环介导等温扩增)技术介绍

放大字体  缩小字体 发布日期:2016-12-11  浏览次数:44
PCR方法在人类及动植物疾病基因诊断、食品分析和环境监测等领域发挥着举足轻重的作用,其灵敏度高、特异性好,是目前最精准的基因诊断方法。然而PCR方法操作起来较复杂,对仪器和人员要求比较高,不适合基层或现场快速诊断,因此在国内的推广速度并不是很快。

2000年日本学者Notomi在Nucleic Acids Res杂志上公开了一种新的基因诊断技术,即LAMP (Loop-mediated isothermal amplification),中文名为“环介导等温扩增反应”,受到了世卫组织WHO、各国学者和相关政府部门的关注,短短几年,该技术已成功地应用于SARS、禽流感、HIV等疾病的检测中,在这次甲型H1N1流感事件中,日本荣研化学公司接受WHO的邀请进行H1N1 LAMP试剂盒的研制。通过荣研公司近十年的推广,LAMP技术已广泛应用于日本国内各种病毒、细菌、寄生虫等引起的疾病检测、食品化妆品安全检查及进出口快速诊断中,并得到了欧美国家的认同。LAMP方法的优势除了高特异性、高灵敏度外,操作十分简单,对仪器设备要求低,一台水浴锅或恒温箱就能实现反应,结果的检测也很简单,不需要像PCR那样进行凝胶电泳,LAMP反应的结果通过肉眼观察白色浑浊或绿色荧光的生成来判断,简便快捷,适合基层快速诊断。

可以预见,在未来的基因诊断领域,LAMP方法将占据大壁江山。

目前,在万方数据库搜索LAMP文章200多篇。 详见:http://s.wanfangdata.com.cn/paper.aspx?q=loop-mediated+isothermal+amplification&o=sortby+CitedCount+CoreRank+date+relevance%2fweight%3d5&f=top&n=10&p=1

1. 优缺点介绍:

LAMP方法优点:灵敏度高(比传统的PCR方法高2~5个数量级);反应时间短(30~60min就能完成反应);临床使用不需要特殊的仪器(试剂盒研发阶段推荐用实时浑浊仪);操作简单(不论是DNA还是RNA,检测步骤都是需将反应液、酶和模板混合于PCR管中,置于水浴锅或恒温箱中63℃左右保温30~60min,肉眼观察结果)。

LAMP方法缺点:灵敏度高,一旦开盖容易形成气溶胶污染,加上目前国内大多数实验室不能严格分区,假阳性问题比较严重,因此我们强烈推荐在进行试剂盒的研发过程中采用实时浑浊仪,不要把反应后的PCR管打开;引物设计要求比较高,有些疾病的基因可能不适合LAMP方法。

2. 对比目前国内实验室同类检测设配使用情况

目前国内基因诊断常采用PCR方法,涉及到PCR仪,该仪器价格国产和进口价格不一,便宜的2~3万也能买到,贵的20多万。条件比较好的实验室和国家机构也有尝试荧光定量 PCR方法的,该方法技术含量高,必须使用荧光定量PCR仪,价格在20~70万不等。

LAMP产品在临床诊断中是不需要特殊仪器的,但临床使用的成品试剂盒有赖于和国内拥有毒株的老师合作开发针对中国国情的疾病LAMP引物,在研发过程中由于涉及引物的选择,引物浓度的调整,及反应温度和时间的优化,需要用一种量化的方式去帮助研究者分析选择数据,因此我们推荐用荣研公司的专利产品LA-320C实时基因扩增仪。

3. 操作的便捷性

LAMP方法较其他基因诊断方法,其最大的优势就在于操作的简便性及对仪器设备和人员要求低。LAMP操作步骤少,只需按照说明书要求将反应液、酶、引物和模板按照规定的量加入PCR管中,置于水浴锅或恒温箱反应30~60min,通过肉眼观察反应管是否变为白色浑浊就能判断结果。
 

 
责任编辑:news8
 
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