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CD3抗原不同克隆号的特点

   日期:2014-10-30     浏览:164    评论:0    
核心提示:《CD3抗原》不同克隆号的特点OKT3、SK7/Leu4和UCHT-1单抗均识别转染有epsilon和delta链或epsilon和gamma链的细胞内CD3的epsilon链,但如果细胞仅转epsilon链,反而无法识别。这说明这三个克隆号的抗体是通过识别epsilon链的构象,即需要epsilon与delta或gamma链结合。因此,如果用这三个克隆的抗体检测epsilon阴性,并不代表
《CD3抗原》不同克隆号的特点
OKT3、SK7/Leu4和UCHT-1单抗均识别转染有epsilon和delta链或epsilon和gamma链的细胞内CD3的epsilon链,但如果细胞仅转epsilon链,反而无法识别。这说明这三个克隆号的抗体是通过识别epsilon链的构象,即需要epsilon与delta或gamma链结合。因此,如果用这三个克隆的抗体检测epsilon阴性,并不代表着epsilon肯定是缺失的,应该再用针对独立epsilon链的抗体(如SP34、APA 1/1或针对胞内epsilon链末端序列的兔多抗)。在实际操作中,由于胸腺细胞在前胸腺细胞阶段以后,delta链和epsilon链是同步表达的,所以上述三个抗体可完美检测T细胞的胞内CD3抗原。不过也可能无法检测部分NK肿瘤。据报道,UCHT-1单抗可标记小脑浦肯野细胞。

WT31单抗
与OKT3、SK7/Leu4和UCHT-1相似,单克隆抗体WT31也是识别转染有epsilon和delta链或epsilon和gamma链的细胞内CD3的epsilon链,而无法识别仅转epsilon链的细胞CD3。在TCR gamma/delta阳性的T细胞中,如果WT31单抗与另一个针对epsilon链的抗体一起孵育,可能造成其因空间位阻无法结合,从而出现WT31单抗只能染TCR alpha/beta阳性T细胞的假象(图1、图2)。
图1 图2
在实际操作时,建议如需与其它CD3 epsilon单抗一起孵育,先用WT31克隆,再用其它克隆。

T3单抗
在TCR gamma/delta和T3克隆同时标记时,FITC荧光的T3克隆无法识别TCR gamma/deltaT细胞(图3)。

图3

T3-FITC和WT31表现类似,在TCR gamma/delta细胞中无法染上(图4)。

图4

这种异常现象很难解释,目前认为可能是由于FITC荧光分子的空间位阻造成。
此外,CD3 delta链在gamma/delta T细胞中的酸性等电点比alpha/beta T细胞中更高,而FITC可增加FITC结合抗体的负电荷,使得抗体更易与alpha/beta T细胞中的CD3 delta链结合,却阻止了与gamma/delta T细胞中糖基化更丰富的CD3 delta链结合。

其他抗体
有些抗体可识别单独的CD3 epsilon链,包括SP-34、APA 1/1、F7.2.38单抗和兔多抗。其中F7.2.38和APA 1/1单抗只能识别胞内位点,因此只能进行胞内CD3 epsilon链的检测。兔多抗和F7.2.38单抗和识别福尔马林、石蜡包埋组织标本的CD3 epsilon链,这使得它们在免疫组化中检测胞内CD3显得非常重要。
 
 
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