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测定单克隆抗体的效价的操作步骤:ELISA法

   日期:2014-10-18     浏览:142    评论:0    
核心提示:①抗原包被:兔抗人IgG作为抗原,用包被液l:8000稀释,100L/孔加入聚苯乙烯96孔反应板中。4℃放置过夜。②洗涤:次日倾去凹孔内的液体,洗涤液洗3次。③封闭:加l00L/孔封闭液,室温放置0.5h.④洗涤:用洗涤液洗3次。⑤加待测样品(一抗):将含单克降抗体的细胞培养上清在另-块板上用PBS连续稀释(按照1:2或1:10),100

抗体效价测定是根据大分子颗粒抗原于其相应的抗体相结合,在适量的电解质存在及一定的温度下,经过一定时间可出现肉眼可见的凝集团块,医学称为凝集反应,一般均以标准抗原测定免疫血清或患者血清中抗体的效价。

①抗原包被:兔抗人IgG作为抗原,用包被液1:8000稀释,100μL/孔加入聚苯乙烯96孔反应板中。4℃放置过夜。

②洗涤:次日倾去凹孔内的液体,洗涤液洗3次。

③封闭:加l00μL/孔封闭液,室温放置0.5h.

④洗涤:用洗涤液洗3次。

⑤加待测样品(一抗):将含单克降抗体的细胞培养上清在另-块板上用PBS连续稀释(按照1:2或1:10),100μL/孔加到已包被的板上,每个样品平行做两份,PBS或空白培养基作为阴性对照,已知样品作为阳性对照。加盖37℃恒温箱温育1~2h。

⑥洗涤:用洗涤液洗3次。

⑦加酶标抗抗体:兔抗鼠IgG-HRP,用封闭液1:8000稀释,100μL/孔,加盖37℃恒温箱温育1h。

⑧洗涤:用洗涤液洗5次,蒸馏水洗2次。

⑨显色:加新鲜配制的底物溶液100μL/孔,室温暗处放置5~30min,显示蓝色。

⑩终止反应、比色:加50μL/孔终止液。颜色变黄;用酶标仪测定450nm处各孔的吸光值,阳性反应的最大稀释度为待测样品的效价。

参考:
Cd2抗体与抗原结合的特性及介导的效应研究:仇俊兰
以抗体竞争结合抗原测定单抗亲和力常数的研究,郭杰标 郭锐 刘艳华 ,http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTotal-DYJD200607049.htm
 
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