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单克隆抗体制备简介

   日期:2014-09-26     浏览:136    评论:0    
核心提示:目前,商品单克隆抗体已有数百种, 常规使用的单抗试剂盒已广泛地用于病原体(病毒、细菌、寄生虫) 、肿瘤标志物、激素、自身抗体、细胞表面抗原等的检测。全国单抗诊断试剂年市场不低于10亿元。治疗用单抗正在进一步开发中。现在厂家或试剂公司除提供单抗试剂盒外,提供的单抗和标记的单抗,一般是小量分装的, 标明有特异性、
目前,商品单克隆抗体已有数百种, 常规使用的单抗试剂盒已广泛地用于病原体(病毒、细菌、寄生虫) 、肿瘤标志物、激素、自身抗体、细胞表面抗原等的检测。全国单抗诊断试剂年市场不低于10亿元。治疗用单抗正在进一步开发中。现在厂家或试剂公司除提供单抗试剂盒外,提供的单抗和标记的单抗,一般是小量分装的, 标明有特异性、类型、效价、用途、规格和价格等。

单克隆抗体是用杂交瘤技术生产的。其制备包括两个主要步骤:

(一)杂交瘤细胞的制备
用于生产单克隆抗体的杂交瘤是能分泌特定抗体的、能在体外长期生长的、单个细胞形成的细胞系(克隆)。其简要制备过程如下:
1.亲本细胞 ①免疫脾细胞:抗原免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞制成悬液;②骨髓瘤细胞:不产生Ig,次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)阴性。
2.杂交 少量浓集的亲本细胞混合,缓慢加入聚乙二醇(PEG 1000),稍后加营养液稀释。
3.选择 用HAT(次黄嘌呤、氨基喋呤、胸腺嘧啶核苷)培养液将细胞分散后进行培养。
4.检测 用血清学方法(多用ELISA法)检测有细胞生长的培养上清液, 寻找能产生所需抗体的细胞。
5.克隆 将能产生所需抗体的细胞充分稀释至每孔一个细胞后进行培养。
6.再检测 再用血清学方法检测培养上清液,寻找能产生所需抗体的细胞。
克隆、检测可反复进行,直至确认所需抗体为单个细胞的后代,即单一克隆所产生分泌。
7.保存 用液氮保存能产生所需抗体的杂交瘤细胞。

(二)单克隆抗体生产
用杂交瘤细胞大量生产所需的单克隆抗体。具体方法如下:
1.从液氮中复苏杂交瘤细胞, 制成悬液。
2.将杂交瘤细胞注入一周前曾注射过液体石蜡等刺激物于腹腔中的Balb/c小鼠腹腔中。
3.1~2周后收获腹水,离心取上清液。纯化鉴定后分装、保存。
 
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