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  • 戊二醛二步法标记HRP抗体
  • 1. 原理戊二醛为一种双功能试剂,通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合,形成酶-戊二醛-免疫球蛋白结合物。2. 试剂及器材(1)0.1M PH6.8磷酸缓冲盐水(PBS):取0.2M Na2HPO4 49ml, 0.2M NaH2PO4 51ml,NaCl1.8克,加蒸馏水至200ml。(2)1.25%戊二醛液:取25%戊二醛50ml与PH6.8的PBS 1ml混合。(3)1M PH9.5碳酸
  • 日期:2014-10-16  浏览次数:82  
  • HRP标记抗体之简易过碘酸钠法
  • 本法是以NaIO4先将HRP表面的糖分子氧化成醛基,然后再与Ig上的氨基相结合,所获酶标记抗体的产率高,将近70%的HRP和Ig结合,99%的Ig与酶结合,酶与Ig的活性无重大损失,是目前最常用的方法。1. 原理经典的过碘酸钠法中需采用二硝基氟苯封闭HRP上残留的-和氨基基以避免酶分子之间的交联。后来Wilson等改用在低PH下使NaIO4氧化
  • 日期:2014-10-16  浏览次数:135  
  • 一抗和二抗的选择
  • 检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择,为缩小抗体的选择范围选中合适的抗体,需要考虑如下几种因素:分析试验应用的类型样本蛋白的结构性质样本的种属抗体宿主的种类抗体的标记和检测1.分析试验应用的类型一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种分析类型,如:可以应用于WB IHC ICC ELASA分析等,如果抗
  • 日期:2014-10-16  浏览次数:107  
  • 如何定量检测cAMP和cGMP
  • 背景介绍1958 年Sutherland 发现了cAMP(环磷酸腺苷),并因此获得了1971 年诺贝尔生理与医学奖[1]. 1963 年Ashman 发现了cGMP(环磷酸鸟苷)[2]。50 年过去了,人们已明白cAMP、cGMP 是在很多生理过程中发挥重要调节作用的第二信使分子。鸟苷酸环化酶可将GTP 催化生成cGMP,cGMP 可以被磷酸二酯酶水解成GDP。激活鸟苷酸环化酶
  • 日期:2014-10-10  浏览次数:100  
纳米颗粒跟踪分析技术
  • 纳米颗粒跟踪分析技术
  • 纳米颗粒跟踪分析(NTA)技术利用光散射和布朗运动的特性获得液体悬浮液中的样本粒度分布。激光光束穿过样本室并沿光束散射光的路径穿过悬浮液中的颗粒,从而能够通过装有摄像头20倍长工作距离放大显微镜,轻松实现颗粒的可视化。 摄像头捕捉布朗运动下移动颗粒的视频文件。 软件单独追踪多个颗粒并利用爱因斯坦方程式计算颗
  • 日期:2014-10-08  浏览次数:146  
奥林巴斯荧光显微镜BX51 操作规范
  • 奥林巴斯荧光显微镜BX51 操作规范
  • BX51 DIC观察:1. 打开明场电源开关(︱为开,○为关)2. 将样品置于载物台上,用样品夹夹好3. 将起偏器、检偏器、DIC棱镜推入光路,荧光滤块转盘拨到1位置,DIC棱镜应与相应的物镜倍数相匹配4. 先选用低倍物镜(10)5. 调节透射光的强度,调节焦距,找到视野6. 换到高倍镜头,观察样品7. DIC观察时,光路选择拉杆拉到中间位
  • 日期:2014-09-28  浏览次数:127  
  • 荧光显微镜标本制作方法/步骤
  • (一) 玻片及盖玻片(Slide and Coverslips)玻片及盖玻片品质必须很好而没有荧光,玻片厚度≦1.0mm 者便可用,玻片之清洗,必须以中性清洁剂洗净,再浸于含有3%HCl 之乙醇12~ 24 小时,然后再储存于纯酒精。要用时,以清洁纱布擦净或火焰烘干。用完后可浸于水中,移去封埋物,再经清洁剂及重酪酸-硫酸混合物*处理。*重酪
  • 日期:2014-09-28  浏览次数:119  
  • DNA提取纯化概述
  • Basically, a nucleic acid, the DNA provides genetic information necessary for the development of living beings. The DNA is analogous to the blueprint used in designing a building. It is composed of polymers strands, that are aligned parallel to each other
  • 日期:2014-09-27  浏览次数:89  
  • 单克隆抗体制备简介
  • 目前,商品单克隆抗体已有数百种, 常规使用的单抗试剂盒已广泛地用于病原体(病毒、细菌、寄生虫) 、肿瘤标志物、激素、自身抗体、细胞表面抗原等的检测。全国单抗诊断试剂年市场不低于10亿元。治疗用单抗正在进一步开发中。现在厂家或试剂公司除提供单抗试剂盒外,提供的单抗和标记的单抗,一般是小量分装的, 标明有特异性、
  • 日期:2014-09-26  浏览次数:126  
  • 抗血清的纯化方法
  • 抗血清纯化的目的是尽量除去抗血清中与目的抗体不相关的成分,以防止抗体外的其他血清成分对试验结果产生影响。因此只能根据不同目的的要求,从抗血清中除去容易干扰的有关成分,或提取相应的免疫球蛋白。抗血清纯化的方法主要有粗提法和精制法两个过程。粗提法主要常用硫酸铵盐析法,精制法分非特异性和特异性两种类型。非
  • 日期:2014-09-26  浏览次数:104  
  • 质粒DNA的提取和纯化\BAC文库构建筛选 -百博明创
  • 质粒DNA是细菌细胞中小的共价闭合环状双链DNA。由于基因工程中使用的载体主要是质粒,因此,质粒DNA的提取和纯化是进行基因工程的重要前提。
  • 日期:2014-09-03  浏览次数:132  标签:BAC文库//基因组文库//细菌人工染色体文库构建筛选
BAC文库构建/筛选技巧-百博明创
  • BAC文库构建/筛选技巧-百博明创
  • 基因组DNA文库有十分广泛的用途,如用于分析、分离特定的基因片段,用以基因表达调控、人类及动植物基因组工程的研究。通常情况下,基因组文库构建的基本流程可以归为4大步骤:分离基因组DNA、对基因组DNA作相关的处理、将基因组DNA片段连接入载体、将重组载体转入宿主细胞
  • 日期:2014-09-03  浏览次数:133  标签:细菌人工染色体文库、BAC文库构建技巧、技术服务、基因组文库
  • 羧基微球与蛋白偶联方法
  • 简述羧基 (COOH) 微球可与蛋白偶联。通过碳二亚胺EDAC活化微球表面的羧基,生成活性酯,再与目标蛋白上的伯胺基反应,完成偶联。汉诺公司提供的Bangs Laboratories 生产的 PolyLink Protein Coupling Kit 可用于羧基微球与蛋白(抗体)的偶联,操作十分简单。尤其适合直径1um或是更大微球与蛋白的偶联。每个试剂盒提供足够5
  • 日期:2014-08-29  浏览次数:117  
  • 镧系解离增强荧光免疫分析技术DELFIA
  • DELFIA (镧系解离增强荧光免疫分析技术) 是检测时间分辨荧光 (TRF) 强度的技术。这一技术使用镧系螯合物标记的试剂,通过洗涤来分离出未被结合的试剂,从而检测体系中被标记的某种化合物或生物分子。 这一技术是基于镧系螯合物(Eu, Sm, Tb, Dy) 发出的荧光。这些镧系螯合物标记比传统的荧光素基团发出的荧光衰减时间长得多,
  • 日期:2014-08-27  浏览次数:154  
活细胞成像方法回顾
  • 活细胞成像方法回顾
  • 实验材料和方法活细胞成像技术彻底革新了生物学家研究细胞、蛋白质以及众多分子之间相互作用和生理过程的方式。这项技术使得科学家们可以实时或者在一段时间内观察细胞内部结构和细胞生理过程。了解这些细胞结构和动态过程对于解释许多细胞生物学问题是至关重要的。与固定细胞的成像研究中提供的快照相比,对于动态变化的观
  • 日期:2014-08-22  浏览次数:265  
  • NovoCyte流式细胞仪检测调节性T细胞
  • 调节性T细胞 (Treg) 是近年来免疫学领域研究的热点,它们不仅参与维持机体免疫平衡,而且在肿瘤免疫和移植免疫中也具有重要作用1,2。一些自身免疫性疾病如多发性硬化症、活动性类风湿性关节炎、I型糖尿病等Treg细胞的数量和功能均会发生变化3。在许多恶性疾病如肺、胰腺和乳腺癌等已经发现Treg细胞明显增高。因此,对Treg细
  • 日期:2014-08-20  浏览次数:153  
  • 核酸探针标记的方法
  • 核酸探针根据核酸的性质,可分为DNA和RNA探针;根据是否使用放射性标记物的与否,可分为放射性标记探针和非放射性标记探针;根据是否存在互补链,可分为单链和双链探针;根据放射性标记物掺入情况,可分为均匀标记和末端标记探针。下面将介绍各种类型的探针及标记方法。 一、双链DNA探针及其标记方法 分子生物研究中,最常用的探
  • 日期:2014-08-11  浏览次数:51  
  • 血清胱抑素C—评估肾小球滤过率的敏感指标
  • 自从1985年以来,半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(cystatin C)已被视为检测肾功能的良好标志物,由于其不受许多生理病理因素的影响,同肾小球滤过率(GFR)的其他标志物相比具有众多优越性。cystatin C在一系列生理病理过程中也发挥着作用,有重要的临床意义。一、肾功能评价和肾功能标志物临床评价肾脏疾病进展和严重程度,一般以肾功
  • 日期:2014-07-31  浏览次数:79  标签:胱抑素C 肾小球 Cystatin GFR 菊粉 碘海醇
表面等离子共振技术(SPR)综述
  • 表面等离子共振技术(SPR)综述
  • 摘要:SPR技术作为检测,分析生物分子相互作用的有效工具,有些国家已经生产出成熟的商业化的SPR传感系统。对SPR生物传感器的工作原理,应用领域,最新进展作出阐述,并对其在生物分子检测领域的应用和研究发展前景进行了讨论。引 言:表面等离子共振技术(surface plasmon resonance technology, SPR)是20世纪90年代发展起
  • 日期:2014-07-22  浏览次数:252  
  • 金属纳米颗粒的表面等离子体共振研究
  • 在过去的几十年里,人们利用化学方法合成了多种多样的金属纳米颗粒,系统地研究了其物理、化学、光学等特性,开发了它们在催化、光子学、等离子体光学、光学传感、生物标记、医学成像,以及表面增强拉曼光谱等诸多方面的功能和应用,取得了许多重要的进展。上述的许多功能和金属纳米颗粒与光相互作用时产生的表面等离子体共
  • 日期:2014-07-22  浏览次数:168  
  • 荧光原位杂交技术
  • 八十年代中期建立并不断改进的荧光原位杂交(Fluoresence in situ hybridization,FISH)技术,因其具有敏感度高、信号强、背景低、快速、多色等独特的优点,克服了放射性杂交探针的不稳定性、低敏感度与高背景、曝光时间长、统计学处理繁琐等局限性,使被誉为细胞遗传学与分子遗传学联姻的原位杂交技术,在分子生物学和遗传
  • 日期:2014-07-21  浏览次数:83  
  • 果蝇唾腺染色体的制备
  • 本世纪初,D.Kostoff用压片法首先在果蝇(Drosophila melanogaster)幼虫的唾液腺细胞核中发现了特别巨大的染色体——唾液腺染色体(salivary gland chromosomes)。由于它具有许多重要特点而成为细胞遗传学、发生遗传学、进化遗传学和分子遗传学研究中不可多得的好材料。
  • 日期:2014-07-21  浏览次数:271  
人类染色体标本制备
  • 人类染色体标本制备
  • 类型及表面货号浓度尺寸(um)规格COMPtrol Kit, Goat anti-Mouse Ig (HL) Coated Particles, 2 populations (NegativeHigh)CMIgP-30-2K1.0107/mL3.
  • 日期:2014-07-21  浏览次数:764  
  • 抗体磷酸化与非磷酸化的区别与关系
  • 非磷酸化是检测蛋白的含量,不能知道其活性状态,磷酸化抗体是检测该蛋白的磷酸化水平如何,侧重于了解该蛋白的一种活性状态。很多信号通路的蛋白在
  • 日期:2014-07-21  浏览次数:88  
  • 免疫共沉淀(Co-IP)技术
  • 疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)利用抗原和抗体的特异性结合以及细菌的Protein A或G特异性地结合到免疫球蛋白的Fc片段的现象开发出来。是确定两种
  • 日期:2014-07-18  浏览次数:82  
  • 荧光偏振免疫分析方法
  • 基本原理免疫荧光技术主要有荧光偏振分析技术、荧光激活细胞分类技术、利用稀土元素镧系铕(Eu3+)做为标记物建立的时间分辨荧光技术以及均相荧光检
  • 日期:2014-07-18  浏览次数:79  
  • 库欣综合征检验诊断方法
  • 血浆促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)测定  参考值:0.2~2.2 pmol/L (1~10 pg/ml)  常用方法:放免法。在孕妇体内,血浆CRH值可随妊娠天数的推
  • 日期:2014-07-15  浏览次数:94  
  • 唾液皮质醇(氢化可的松)检测方法
  • 检测仪器:LC-20AD 高效液相色谱仪(日本岛津)前处理方法:将1.2 mL乙酸乙酯加入到0.5mL的唾液或者内标液(10L 曲唑酮)中,涡旋3 min,离心2 min,将
  • 日期:2014-07-15  浏览次数:121  
细胞凋亡检测方法汇总
  • 细胞凋亡检测方法汇总
  • 一、细胞凋亡的形态学检测根据凋亡细胞固有的形态特征,人们已经设计了许多不同的细胞凋亡形态学检测方法。1. 光学显微镜和倒置显微镜(1) 未染色细胞
  • 日期:2014-07-15  浏览次数:130  
  • Gel Electrophoresis of RNA - general
  • Electrophoresis through agarose or polyacrylamide gels is the standard way to separate, identify and purify nucleic acid fragments. The lo
  • 日期:2014-07-15  浏览次数:103  
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