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  • 辣根过氧化物酶介绍
  • 凡无毒性又能呈现有色化学反应的酶,原则上均可作为标记用。但作为标记抗体用的酶应满足下列要求:(1)来源方便,易于纯化;(2)比活性高,性质稳定;(3)酶活性和量能用简单方法测定。目前在免疫酶技术中常用的酶为辣根过氧化物酶(HRP)和硷性磷酸酶(AP),其次还有葡萄糖氧化酶,-半乳糖苷酶、溶菌酶和苹果酸脱氢酶等。由于辣根
  • 日期:2015-02-16  浏览次数:52  
  • 酸性α-醋酸酯酶检测
  • 【实验原理】 酸性-醋酸酯酶检测(-acid naphthyl acetate esterase assay),是利用血细胞中的酸性-醋酸萘酚酯酶(-acid naphthyl acetate esterase,ANAE)在弱酸性(pH 5.8)条件下能水解基质液中的-醋酸萘酚,产生-萘酚,-萘酚再与六偶氮副品红偶联形成不溶性暗红色偶氮副品红萘酚沉淀,定位于胞质内酶活性处。【材料】1.器材
  • 日期:2015-02-14  浏览次数:63  
  • N-碱性磷酸酯酶检测
  • 【原理】N-碱性磷酸酯酶检测(N-alkaline phosphatase assay)的原理是用P-硝基酚磷酸盐(P-NPP)作为细胞碱性磷酸酯酶(APase)总活性检测的基质,在反应中生成P-硝基酚,测量400nm时的光密度,借以检测细胞N-APase的总活性。此外,可通过巯基乙胺-S-磷酸盐(CASP)作为基质来测定N-Apase的活性。通过酶反应,生成半胱胺,用二
  • 日期:2015-02-14  浏览次数:40  
  • 末端脱氧核苷酰转移酶检测
  • (一)酶免疫组织化学检测【实验原理】 酶免疫组织化学检测(enzyme immunohistochemistry assay)是利用一种DNA聚合酶,即末端脱氧核糖核酸转移酶(terminal deoxynucleotidyl transferase, TdT),直接催化细胞的脱氧核苷酸,使其转移到低聚核苷酸或多聚核苷酸的3-OH端,合成单链DNA。兔抗牛TdT抗体能和人细胞的TdT产生交叉
  • 日期:2015-02-14  浏览次数:45  
  • 白细胞趋化试验
  • 【实验原理】 白细胞趋化试验(white blood cell chemotaxis test),是在趋化室微孔滤膜的一侧放入粒细胞,另一侧放入趋化因子(细菌毒素、补体C3a、小淋巴因子等),检测离体粒细胞潜过滤膜到达趋化因子这一侧定向移动的能力。【材料】1.器材(1)趋化室:用有机玻璃自制,分上、下两室,上室直径5.5mm,下室直径5.5mm,
  • 日期:2015-02-14  浏览次数:40  
  • 硝基四氮唑蓝还原试验
  • 【实验原理】 硝基四氮唑蓝还原试验(nitroblue tetrazolium reduction test),是观察中性粒细胞对硝基四氮唑蓝(nitroblue tetrazolium,NBT)还原作用的试验。NBT是一种染料,其水溶液呈淡黄色。当被吞入或渗入中性粒细胞后,有产生过氧化物酶的作用,并可接受己糖旁路代谢途径中葡萄糖-6-磷酸脱氢酶作用产生的NADPH氧化脱下
  • 日期:2015-02-14  浏览次数:56  
  • 血清溶菌酶活性试验
  • 【实验原理】 血清溶菌酶活性试验(serum lysozyme activity test),是利用溶菌酶能水解革兰氏阳性球菌细胞壁的乙酰氨基多糖成分,使细胞壁裂解,用对溶菌酶较敏感的微球菌悬液为作用底物,根据微球菌的溶解程度来检测血清或尿中溶菌酶的活性。(一)平板打孔法【材料】1.器材 接种环、毛细滴管、无菌打孔器(孔径5mm左右
  • 日期:2015-02-14  浏览次数:50  
  • 细胞内细胞因子染色步骤
  • 细胞准备:1、 收集细胞,用细胞染色Buffer(Cat.No. BF1001-01)制成单细胞悬液,调整细胞浓度约为1107/ml。2、 如需裂解红细胞,将红细胞裂解液(Cat.No. BF1003)稀释至1并平衡至室温,用适量的1红细胞裂解液将细胞悬起,室温避光孵育10分钟;加入细胞染色Buffer(Cat.No. BF1001-01)终止裂解,350g离心力离心5分钟,弃
  • 日期:2015-02-13  浏览次数:32  标签:细胞染色 细胞破膜
  • 细胞表面染色步骤
  • 细胞准备:1. 采集组织(脾,淋巴结,胸腺和骨髓),用细胞染色buffer(Sungenebiotech Cat. BF1001-01)制成单细胞悬液。对于体外刺激的细胞,直接将刺激后的细胞悬浮在细胞染色Buffer,然后进行第2步。2. 加满染色细胞染色buffer(Sungenebiotech: BF1001-01)至15ml, 350g 离心细胞悬液5分钟,弃掉上清。红细胞裂解:3
  • 日期:2015-02-13  浏览次数:46  
  • 分析与免疫细胞的流式细胞仪检测亚组人群纳米粒子的相互作用
  • Summary分析与免疫细胞的流式细胞仪检测亚组人群纳米粒子的相互作用。Date Published: 3/28/2014, Issue 85; doi: 10.3791/51345Keywords: Immunology, Issue 85, Flow cytometry, blood leukocytes, microglia, Nanoparticles, internalization, Fluorescence, cell purificationCite this ArticleGamucci
  • 日期:2015-02-04  浏览次数:113  
  • 关于荧光补偿设置单染对照的三条原则
  • 译者:FlowJo技术支持, 张庶首先,同时也是最重要的是必须为同批次实验的每个荧光参数设置单染对照!其次,有三条原则来判断荧光补偿单染对照选择的合适与否。1.单染对照的荧光强度至少要与实验样本一致,或者要超过实验样本的荧光强度。2.阳性和阴性的背景荧光强度应该一致。3.补偿所用对照的荧光染料必需与当前实验所用的
  • 日期:2015-02-04  浏览次数:54  
  • 流式细胞仪荧光补偿
  • 在流式细胞仪分析中用到的荧光补偿这个术语是指修正荧光渗漏的过程,如从探测器除去除匹配荧光以外的任何荧光信号。荧光补偿过程从原理上来说相对简单,但实际上涉及许多精细、敏感的方面从而使在实践操作相当复杂。非常不幸,荧光补偿操作可能是在流式操作中的数据采集和分析等步骤中最少被了解和掌握的内容,可能是因为在介
  • 日期:2015-02-04  浏览次数:106  
  • 核酸及蛋白质常用数据
  • 实验室常用技术参数资料(一)一、核酸及蛋白质常用数据1.核苷三磷酸的物理常数化合物分子量max(pH7.0)1摩尔溶液(pH7.0)中max时的最大吸收值OD280/OD260ATP507259154000.15CTP48327190000.97GTP523253137000.66UTP484262100000.38dATP494259152000.15dCTP46727193000.98dGTP507253137000.66dTTP48226796000.712.常用核酸
  • 日期:2015-01-29  浏览次数:23  
  • S-100蛋白的检测及其临床意义
  • S-100蛋白是一种酸性钙结合蛋白,分子量21 000,主要存在于中枢神经系统各部的星状神经胶质细胞的胞液中,因其在饱和硫酸铵中能够100%溶解而得名。S-100蛋白由和两种亚基组成三种不同的形式:S-100 (S-100 b)主要存在于神经胶质细胞和雪旺细胞,S-100 (S-100 a0)主要存在于神经胶质细胞,S-100 (S-100 a)主要存在于横纹肌、
  • 日期:2015-01-29  浏览次数:22  标签:S100 ELISA CSF IRMA RIA FIA
  • S100蛋白分子生物学及其在检验医学中应用
  • 近年来,对脑组织损伤的神经化学标志物的研究正在逐步深入,这些标志物主要为S100蛋白家族和神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase, NSE)等。研究表明,在人或动物的脑梗塞、脑外伤或心脏外科手术时,血清S100和NSE的浓度均有所升高。测定S100蛋白浓度有助于临床上判断神经组织的病灶大小、治疗效果和判断病人的预
  • 日期:2015-01-29  浏览次数:32  
  • 高通量DNA合成测序化学研究进展
  • 作者:陈 婧,肖鹏峰作者单位:东南大学生物科学与医学工程学院,生物电子学国家重点实验室,南京Email: xiaopf@seu.edu.cn摘 要:高通量DNA测序是近年来发展起来的革命性技术,大大推动了快速、廉价获取基因组信息的能力,进而对生命科学产生深刻的影响。测序化学是高通量DNA测序的重要内容,且发展十分迅速;一些构思巧妙
  • 日期:2015-01-22  浏览次数:26  标签:生物化学 高通量DNA测序 合成测序 测序化学
  • 双色红外荧光技术在蛋白磷酸化检测中的应用
  • 【作者】 刘靖华; 唐靖; 蓝兴国; 刘亚伟; 李志杰; 陈芳; 邓鹏; 姜勇; 【Author】 LIU Jing-hua, TANG Jing, LAN Xing-guo, LIU Ya-wei, LI Zhi-jie, CHENG Fang, DENG Peng, JIANG Yong Department of Pathophysiology and Key Laboratory of Functional Proteomics of Guangdong Province, Southern Me
  • 日期:2015-01-22  浏览次数:19  
  • Cell Line Authentication Testing 细胞株的认证检测
  • E.C. Bryda, H. Berg, J. Gohndrone, L.K. Riley RADIL, 4011 Discovery Drive, Columbia, MO 65201Sponsored by RADILMisidentification as well as inter- and intra-species cross contamination of cell lines is widespread and has a substantial negative impact on b
  • 日期:2015-01-18  浏览次数:51  
  • DyLight Fluor荧光染料介绍
  • DyLight Fluor是由Dyomics和赛默飞世尔科技合作开发的系列荧光染料,具有光谱宽度广、荧光强度高、光学稳定性好、对pH不敏感、分子较小渗透性好等优点,结合荧光显微镜等设备,可应用于生物医学研究中对组织、细胞和生物分子等的标记、定位 。DyLight系列染料通过化学合成方法在香豆素、氧杂蒽(如荧光素和罗丹明)、青色素等
  • 日期:2015-01-16  浏览次数:132  
  • 流式荧光素的选择
  • 为什么要推荐使用Alex Fluro488和Alex Fluro647呢?因为这些荧光非常明亮,对激光非常稳定,适合流式细胞仪的光谱性质,对PH值不敏感,具有水溶性。此外,他们联合使用时发射光谱存在巨大差异,无需补偿。如果检测的指标数目超过了流式细胞仪的通道,怎么办?如果需要做5个指标,而流式细胞仪只能做4个通道,首先将指标归成
  • 日期:2015-01-15  浏览次数:231  标签:流式细胞仪 通道 Calibur 荧光素 Alex PE-Cy5 PerCP 补偿
  • 酵母双杂交筛选
  • 1. 操作流程诱饵基因转化筛库宿主菌Y190―― 含诱饵基因的Y190 保种―― 诱饵基因的自激活检测―― 筛库(组织库或者小文库)―― 挑选鉴定阳性克隆―― 抽提阳性克隆中PREY 质粒并在细菌中扩增―― 猎物(Prey)质粒与诱饵(Bait)质粒共同转化Y190,验证其相互作用2. 方 法2. 1 诱饵基因转化筛库宿主菌Y1901) 3 个1mm 克隆接种
  • 日期:2015-01-12  浏览次数:112  
  • 单克隆抗体与多克隆抗体的对比与选择
  • Polyclonal AntibodiesThe immune response to an antigen generally involves the activation of multiple B-cells all of which target a specific epitope on that antigen. As a result a large number of antibodies are produced with different specificities and epi
  • 日期:2015-01-06  浏览次数:119  标签:Polyclonal Antibody immunoglobulin
  • Antibody Applications 抗体应用
  • ELISAEnzyme Linked Immunosorbent Assay or ELISA is one of the most common tests conducted in immunobiochemistry. The principle involves immobilising antibodies onto a microtitre plate. These antibodies are labelled with an enzyme; the fixed enzyme reacts
  • 日期:2015-01-06  浏览次数:148  
  • PCR方法实验步骤和常见问题
  • 简介聚合酶链式反应,简称PCR,是一种将几个或几十个拷贝数DNA片段扩增至上百万份拷贝的方法,这是迄今为止最为重要的技术之一。PCR技术的影响不仅仅局限于生物科学领域,几乎人人都可以感受到PCR所带来的改变,在亲子鉴定以及犯罪调查中PCR技术便有广泛应用。而人类基因组计划,这一具有划时代意义的测序工程,如果缺少了P
  • 日期:2015-01-06  浏览次数:110  标签:PCR 聚合酶链式反应 DNA聚合酶 dNTP 引物 变性 退火 延伸 维持
  • 全自动化的福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)组织标本提取技术
  • 西门子开发了全自动的核酸纯化方法,其支持分子病理学实验室常规的临床诊断分析,为广泛的长期临床随访资料保存下来的福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)的组织材料中生物标志物的回顾性研究铺平了道路。
  • 日期:2015-01-06  浏览次数:178  标签:FFPE 固定石蜡包埋 磁珠
  • 动植物组织mRNA 提取
  • 一、材料水稻叶片或小鼠肝组织。二、设备研钵,冷冻台式高速离心机,低温冰箱,冷冻真空干燥器,紫外检测仪,电泳仪,电泳槽。三、试剂1、无RNA 酶灭菌水:用将高温烘烤的玻璃瓶(180℃ 2 小时)装蒸馏水,然后加入0.01%的DEPC(体积/体积),处理过夜后高压灭菌。2、75%乙醇:用DEPC 处理水配制75%乙醇,(用高温灭菌器皿配
  • 日期:2014-12-29  浏览次数:110  标签:mRNA Trizol
  • 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化
  • 一概述:在自然条件下,很多质粒都可通过细菌接合作用转移到新的宿主内,但在人工构建的质粒载体中,一般缺乏此种转移所必需的mob 基因,因此不能自行完成从一个细胞到另一个细胞的接合转移。如需将质粒载体转移进受体细菌,需诱导受体细菌产生一种短暂的感受态以摄取外源DNA。转化(Transformation)是将外源DNA 分子引入受体细胞
  • 日期:2014-12-29  浏览次数:105  
  • 质粒 DNA 的分离、纯化和鉴定(三、实验步骤)
  • 一、 细菌的培养和收集将含有质粒 pBS 的DH5菌种接种在LB 固体培养基(含50g/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50g/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。二、 质粒 DNA 少量快速提取质粒 DNA 小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这
  • 日期:2014-12-29  浏览次数:87  
  • 质粒 DNA 的分离、纯化和鉴定(二、材料、设备及试剂)
  • 一、材料含 pBS 的E. coli DH5或JM 系列菌株,1.5ml 塑料离心管(又称eppendorf 管),离心管架。二、设备微量取液器(20l,200l,1000l), 台式高速离心机,恒温振荡摇床, 高压蒸汽消毒器(灭菌锅), 涡旋振荡器, 电泳仪,琼脂糖平板电泳装置和 恒温水浴锅等。三、试剂1、 LB 液体培养基(Luria-Bertani) :称取蛋白胨(Tryptone)
  • 日期:2014-12-29  浏览次数:84  
  • 质粒 DNA 的分离、纯化和鉴定(一、概述)
  • 把一个有用的目的DNA片段通过重组DNA技术,送进受体细胞中去进行繁殖和表达的工具叫载体(Vector)。细菌质粒是重组DNA 技术中常用的载体。质粒(Plasmid)是一种染色体外的稳定遗传因子,大小从1-200kb 不等,为双链、闭环的DNA 分子,并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中,它具有自主复制和转
  • 日期:2014-12-29  浏览次数:81  
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