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国内首个利用端粒酶技术检测肿瘤诊断试剂批准上市

   日期:2017-08-15     来源:今复康    评论:0    
核心提示:近日,浙江今复康生物科技有限公司研制的端粒酶逆转录酶亚基(hTERT)mRNA检测试剂盒(核酸扩增法),经国家食品药品监督管理总局批准上市,这是我国首个利用端粒酶技术进行肺部肿瘤辅助诊断的检测试剂,填补了国内
近日,浙江今复康生物科技有限公司研制的“端粒酶逆转录酶亚基(hTERT)mRNA检测试剂盒(核酸扩增法)”,经国家食品药品监督管理总局批准上市,这是我国首个利用端粒酶技术进行肺部肿瘤辅助诊断的检测试剂,填补了国内空白。

端粒酶逆转录酶(TERT/hTERT)是细胞内一种与癌变密切相关的逆转录酶,除生殖干细胞和造血干细胞之外,人体正常细胞不表达hTERT。痰液等源于肺呼吸道的样品若检测出hTERT mRNA,则表明存在癌变细胞。本产品首次采用具有完全自主知识产权的WFTR-PCR技术,整合了一步裂解、探针杂交、酶切/PCR体系,在提取患者的痰液后,利用荧光定量PCR的扩增放大,进行肺癌的辅助诊断,灵敏度比痰液细胞学、RT-PCR等方法有了几何级数的大幅提高。

该产品在浙江、上海等3家知名医疗机构进行了临床试验,结果具有较高的灵敏度和特异性,为肺癌辅助诊断提供了一种无创、快速、便捷的检测手段,具有较大的潜在社会和经济效益。

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WFTR-PCR的技术路线如下图所示:


 

图注:RS,限制性内切酶;Probe B,模板探针B;Probe A,锚定探针A;Probe C,互补探针C

主要步骤说明:

S0: 锚定探针A的固定

S1: 细胞裂解释放出RNA,裂解液中含模板探针B和互补探针C

S2: 锚定探针A结合目标RNA,同时与目标RNA结合的模板探针B也被吸附;其他物质被吸除,多余的模板探针B与互补探针C形成 dsDNA

S3: 酶切反应,痕量的模板探针B/互补探针C形成的dsDNA被切割,与目标RNA结合的模板探针B保持完整

S4: PCR,与目标RNA结合的模板探针B被扩增

WFTR-PCR技术与传统的RT-PCR技术的比较归纳于下表: 

 

WFTR-PCR

(本试剂盒方法)

RT-PCR

(传统方法)

锚定探针/模板探针/互补探针的应用

+

-

细胞裂解

+

+

RNA抽提

-

+

苯酚氯仿或亲和柱的使用

-

+

DNase处理及再抽提

-

+

RNA样品浓度测定及调整

-

+

逆转录酶及逆转录反应

-

+

RNA操作全程抑制RNase

+

-

反应体系中添加RNase抑制剂

-

+

整合dsDNA特异酶切

+

-

PCR优化

+

-

cDNA克隆应用

-

+

操作难度

简单

复杂

从细胞裂解到出结果的步骤数

5

15

从细胞裂解起全程耗时(hr)

~3

~6

成本比较

1X

2X

 
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